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FUJIFILM Wako 內毒素檢測相關問題答疑

來源：作者：人氣：-發表時間：2021-03-31 11:00:00【大中小】

◆內毒素檢測相關問題

Q1.　如何溶解內毒素標準品？

Q2.　依據日本藥典進行檢測時，應使用哪種內毒素標準品？

Q3.　如何區分凝膠法、比濁法、比色法？

Q4.　檢測時必須使用檢測專用耗材嗎？

Q5.　如何確定胃腸道外給藥的內毒素標準值？

Q6.　如何計算MVD（最大有效稀釋率）？

Q7.　如何對不溶于水的樣品進行內毒素檢測？

Q8.　樣品保存方法？

Q9.　如何調整樣品的pH值？

Q10.　檢測用試管可重復使用嗎？

◆檢測儀器相關問題

Q11.　各款內毒素檢測儀器有什么區別？

Q12.　終點法與動力學法有何區別？

Q13.　Toxinometer的檢測原理是什么？

Q14.　使用Toxinometer時可隨意更改閾值、等待時間和計數嗎？

Q15.　Toxinometer ET-6000的檢測波長是多少？

Q16.　使用簡易型內毒素檢測系統Endosafe-PTS Leader需要注意的地方是？

◆檢測試劑相關問題

Q17.　什么是內毒素特異性試劑？

Q18.　單次檢測和多次檢測有什么區別？

Q19.　雖然單次檢測和多次檢測的樣本量不同，但有必要考慮濃度的差異嗎？

Q20.　鱟試劑的保存溫度是？

◆內毒素檢測相關問題

Q1.　如何溶解內毒素標準品？

日本藥典內毒素標準品（JP-RSE）：加入內毒素檢測用水使內毒素限值達到10,000EU/mL，再劇烈攪拌5分鐘。

美國藥典內毒素標準品（USP-RSE）：加入5mL內毒素檢測用水（2000EU/mL），再劇烈攪拌30分鐘。

內毒素控制標準（CSE）：加入內毒素檢測用水使內毒素限值達到1000EU/mL，再劇烈攪拌2分鐘。

Q2.　依據日本藥典進行檢測時，應使用哪種內毒素標準品？

必須使用藥典規定的內毒素標準品。（JP-RSE、USP-ESE、EP-RSE）

Q3.　如何區分凝膠法、比濁法、比色法？

進行半定量分析時采用凝膠法，進行定量分析時采用比色法和比濁法。

比色法和比濁法基本上沒有太大的區別。但它們在檢測儀器、試劑的檢測范圍以及檢測成本上存在差異。選擇前需慎重考慮。

如果對凝膠法、比色法和比濁法的檢測結果存在疑問或爭議，請以凝膠法的結果為最終判定。

Q4.　檢測時必須使用檢測專用耗材嗎？

不必使用檢測專用耗材。但必須使用不含內毒素或β-葡聚糖的器具。玻璃器具可以通過30分鐘以上，超過250℃的干熱滅菌來滅活內毒素。洗脫出的微量金屬離子（Fe、Al、Ga、Cr等）會影響內毒素檢測，因此要避免使用金屬器具。除了獲得生產商的保證外，還要確認一次性塑料器①不受內毒素污染；②不吸附內毒素；③洗脫物不含影響檢測結果。

Q5.　如何確定胃腸道外給藥的內毒素限值？

藥典各項中沒有規定內毒素限值的樣品設定如下。

內毒素限值(EU/mL)= K值(EU/kg)/人最大給藥量(mL/kg)＊1

＊1：頻繁或連續注射時，人最大給藥量為1小時內注射的最大劑量。

-參考-

日本、美國、歐洲藥典規定的K值（致熱內毒素量）

Q6.　如何計算MVD（最大有效稀釋率）？

計算公式如下。

λ：※凝膠法中表示標記凝膠靈敏度，光學法中表示標準曲線的最小濃度

FUJIFILM Wako的Toxinometer/MPR內毒素檢測系統配套軟件"ToximasterQC"帶有MVD自動計算功能。

Q7.　如何對不溶于水的樣品進行內毒素檢測？

不溶于水的樣品如果能溶于1％乙醇或1％DMSO，進行檢測時不會對鱟試劑造成影響。

不溶于上述溶劑的樣品可使用鱟試劑PS Single（產品編號：299-54501），檢測時不受共存物質的影響。

（應用實例）可溶于乙醇、硅油、大豆油、橄欖油、硬脂酸、蛋黃卵磷脂、油佐劑疫苗、白蛋白制劑、凝血因子制劑（第8因子）、干擾素制劑、抗凝血酶III制劑、免疫球蛋白制劑等溶劑的樣品都能進行檢測。

Q8.　樣品保存方法？

保存時請注意以下幾點。

● 樣品中不能有活菌繁殖

● 內毒素值不會根據保存期而發生變化

● 確保保存容器無內毒素污染，無內毒素吸附，不含影響檢測結果的洗脫物。

Q9.　如何調節樣品的pH值？

如果樣品溶液的pH值不在6.0～8.0范圍內，就需要作出調節。

（內毒素檢測的最佳pH值約為7.3，但由于鱟試劑中含有緩沖組分，因此允許在pH6.0～8.0內進行檢測）

能進行稀釋的樣品可通過稀釋調節pH值。不能稀釋的樣品，可在樣品溶液中加入稀NaOH或HCl溶液來調節pH值。

還可以利用緩沖液來稀釋樣品溶液。建議使用按需配制的NaOH、HCl調節pH值。

Q10.　檢測用試管可重復使用嗎？

檢測用試管不可重復使用。

稀釋或樣品保存用試管可在進行250℃超過30分鐘的干熱滅菌后重復使用。

◆檢測儀器相關問題

Q11.　各款內毒素檢測儀有什么區別？

檢測儀器的選擇請參照下表。

* MPR 儀器不可以提供。

Q12.　終點法與動力學法有何區別？

● 終點法：反應一段時間后，利用反應后的濁度或吸光度的大小與內毒素濃度的反應關系的方法

● 動力學法：利用達到一定濁度或吸光度的時間和內毒素濃度的反應關系的方法，又或者利用濁度或吸光度的實時變化率與內毒素濃度之間的反應關系的方法

Q13.　Toxinometer的檢測原理是什么？

內毒素檢測儀-Toxinometer® ET-6000

Q14.　使用Toxinometer時可更改閾值、等待時間和計數嗎？

可以。但在這種情況下不能保證試劑的性能。

Q15.　Toxinometer ET-6000的檢測波長是多少？

中心波長為430nm。

Q16.　使用簡易型內毒素檢測系統Endosafe-PTS Reader需要注意的地方是？

請將使用過的Cartridge恢復至室溫后再使用。

Endosafe-PTS主機最好每年進行一次溫度校正。

◆檢測試劑相關問題

Q17.　什么是內毒素特異性試劑？

一般來說，鱟試劑除了與內毒素，還會與真菌細胞壁組成成分的（1→3）-β-D-葡聚糖發生反應。只與內毒素產生反應的試劑就是內毒素特異性試劑。

Q18.　單次檢測和多次檢測有什么區別？

● 單次檢測：預先將單次分量的鱟試劑添加到反應試管中

● 多次檢測：用內毒素檢測用水溶解鱟試劑，再將一定量的鱟試劑添加到反應試管或孔板中使用

Q19.　單次檢測和多次檢測的樣本量不同，但需要考慮濃度的差異嗎？

試劑是根據添加的樣品量來制備的，因此上述問題不存在。

但由于上樣量不同，當樣品中含有反應干擾因子時，它對檢測的抑制和促進會受到不同方式的影響。

Q20.　鱟試劑的保存溫度是？

所有鱟試劑都應冷藏保存。

溶解后的鱟試劑要在每種試劑要求的條件下保存。（例如：ES-Ⅱ系列請在冷凍當日使用。）

非當日使用的話要在每種鱟試劑要求的保存溫度※下冷凍保存，并在2周內使用。請勿重復凍融一次以上。

※ES-Ⅱ系列：－10℃～－30℃

　ES-F系列、ES-F/Plate：－10℃～－20℃

　Color KY系列：－80℃以下

　J/F系列：-20℃～-30℃

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