【技術問答】Ludger DMB唾液酸釋放標記試劑盒問題集錦
Ludger DMB唾液酸釋放標記試劑盒FAQs
Q: 為什么要同時使用beta-巰基乙醇和亞硫酸鈉,兩個都是抗氧化的?
A: Sodium Dithionite (Reductant) 亞硫酸鈉是作為還原劑存在的。巰基乙醇是溶解還原劑的。
Q: 如果β巰基乙醇是用來溶解低亞硫酸鈉的話,為什么不直接用水溶解?是否還有別的作用?
A: 巰基乙醇可以讓標記后的產品更穩定。
Q: 硫酸或醋酸或唾液酸酶能不能將抗體分子上唾液酸完全解離或切除下來?假如可以,用什么方法可以證明它們能將抗體分子上唾液酸完全解離或切除下來?
A: 作為陽性對照,我們建議使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白,我們同樣建議使用最純化的LudgerBioQuantTM糖肽標準品來作為陽性對照。這個糖肽標準品(貨號: BQ-GPEP-A2G2S2-10U)是一個復雜的N-連接雙觸角聚糖,終止于兩個N-乙酰神經氨酸。使用此標準品可以檢查聚糖釋放、標記和回收的有效性,并可增強您的唾液酸測量準確性。
Q: 唾液酸分NeuAc和NeuGC,我檢測時NeuGC的量很少,能否合并計入到唾液酸的含量中?
A: 不可以。NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神經氨酸)的定量分析是監管機構在生物制藥表征的產品標準規格指南中提出的一個要求。特別是,人類和非人類的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分別)相對水平測定是非常重要的,因為有些病人有高水平的抗神經氨酸(anti-NeuGc)抗體,這可導致中和反應和快速清除含有神經氨酸(NeuGc)的生物藥品 (Nguyen等,2005)。由于唾液酸(NeuAc)和神經氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意義,它通常被認為是生物治療藥物的關鍵質量屬性(CQA)。
Q: 關于非人源的N-羥乙酰神經氨酸在唾液酸中的含量限定,國際上有沒有相關的資料參考,因為N-羥乙酰神經氨酸對人體有害,在新藥研發中,有沒有對它的含量限定標準?
A:目前沒有這種NGNA含量的國際規定,只能是廠家根據產品性質及相關資料進行風險評估。非人唾液酸N-羥乙酰神經氨酸含量當然是越低越好。國際上目前還沒有這個具體規定。但這個問題其實并不是問題。因為CHO細胞本身低表達唾液酸,一般不到5%,并且主要是以人源的N-乙酰神經氨酸為主。
Q: 用 LT-KDMB-A1 DMB 唾液酸釋放標記試劑盒和超高壓色譜柱LS-UR2-2.1x100 ,空白是跟樣品平行處理的,洗脫程序也是按照說明書程序,最后加了個洗脫程序。做出來的圖譜:溶劑和樣品峰有重疊,在2.5min左右;而ludger的圖譜:溶劑和樣品峰是分開的。如果使溶劑峰和樣品峰分來,是否能通過調整色譜條件和流動相,給些建議?
A: 將用50%乙腈洗脫改成現在用90%乙腈洗脫,溶劑和樣品峰可以分開了,原因可能是之前用50%乙腈沒有洗脫干凈,柱子里有殘留溶劑峰。
Q: DMB 唾液酸釋放標記試劑盒(# LT-KDMB-A1 )夠用22個樣品,收集夠20個左右的樣品要1-2個月,時間比較長,問試劑盒能否分批使用,還是要一次用完?
A: DMB試劑本身不穩定,要在用的當天現配現用。即不能分批使用,要一次用完。
Q: 同時做20個樣品進樣,第一天和第二天跑出來的圖譜 重復性不太好,會有偏差,這個有沒有方法避免?
A: 具體偏差在多少?我們現行的質控標準將偏差設為±20%,如果在這個范圍之內,是屬于正常現象。

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